黄连解毒汤有效部位调控VEGF表达对中动脉栓塞大鼠海马神经元的保护

目的:观察黄连解毒汤有效部位(总生物碱、总黄酮、总环烯醚萜)对中动脉栓塞大鼠海马神经元的保护作用。并通过检测缺血中心区(尾壳核)和远隔脑区(海马)血管内皮生长因子VEGF的表达,探讨其作用机制。方法:建立中动脉栓塞大鼠模型,免疫荧光染色技术观察神经元核蛋白NeuN及血管内皮生长因子VEGF的表达。结果:脑缺血7 d大鼠海马神经元核蛋白NeuN表达下调,尾壳核、海马VEGF免疫染色强度降低,差异较假手术组有统计学意义(P0.05)。黄连解毒汤水提取物和总黄酮可提高海马神经元NeuN表达(P0.05);总生物碱、总黄酮、总环烯醚萜组大鼠海马CA1区VEGF表达较模型组增强(P0.05);总黄酮还可明显上调尾壳核VEGF表达(P0.01)。结论:黄连解毒汤总黄酮对缺血中心区、远隔脑区VEGF均有调节作用,可减轻脑梗死远隔部位海马CA1区神经元继发性损害。     

淫羊藿和女贞子配伍对绝经后骨质疏松症大鼠TGF-β1/Smads信号通路的实验研究

目的 研究淫羊藿和女贞子配伍对绝经后骨质疏松症（postmenopausal osteoporosis,PMOP）大鼠转化生长因子（transforming growth factor,TGF）-β1/Smads信号通路的影响。方法 将48只SPF级8月龄雌性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、淫羊藿组、女贞子组、淫羊藿和女贞子配伍组（配伍组）、雷洛昔芬组。对大鼠行双侧卵巢切除术造模,术后1周开始给予相应的药物治疗至术后13周结束。运用酶免法检测血清TGF-β1含量、蛋白免疫印迹法（western blot,WB）和免疫荧光法（immunofluorescence staining,IF）检测骨组织中TGF-β1、p-Smad2/3和Smad7蛋白表达,通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）法检测骨组织中TGF-β1、Smad2、Smad3和Smad7 mRNA的表达。结果 与模型组比较,淫羊藿、女贞子配伍组能增加大鼠血清TGF-β1含量（P<0.05）,上调骨组织中TGF-β1、Smad2、Smad3的mRNA表达和TGF-β1、p-Smad2/3的蛋白表达（P均< 0.01）,下调骨组织中Smad7的mRNA和蛋白表达（P均< 0.01）,且配伍组对上述指标的调节作用优于淫羊藿或女贞子单用。结论 淫羊藿和女贞子配伍可以调节PMOP大鼠TGF-β1/Smads信号通路中细胞因子的表达,从而调节骨代谢。     

北京地区种植不同种源的柴胡药材质量分析

目的:通过田间种植试验,分析不同种源的柴胡药材质量,为确定适宜北京地区种植柴胡的种源提供技术依据。方法:在北京市顺义区设置田间试验,种植从河北安国药材市场、安徽亳州药材市场、中国医学科学院药用植物研究所购买的3个种源的柴胡,采用紫外-可见分光光度法及高效液相色谱(HPLC)法,测定药材样品中的柴胡总皂苷、柴胡皂苷a、柴胡皂苷c和柴胡皂苷d的含量,以甘肃、山西种植柴胡药材为对照,评价北京地区3个不同种源的柴胡药材质量。结果:3种不同种源的柴胡药材,在柴胡总皂苷、柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d含量等化学成分指标与甘肃、山西种植柴胡药材的差异无统计学意义,且符合中华人民共和国药典的标准,其中河北安国药材市场、中国医学科学院药用植物研究所种源的药材质量更优。结论:北京地区是种植柴胡的适宜产区,种源可从河北安国药材市场或中国医学科学院药用植物研究所购买。     

蛭丹化瘀组方对内毒素诱导肺损伤大鼠CGRP、ET-1的影响

目的:探讨蛭丹化瘀组方对内毒素诱导肺损伤大鼠血浆降钙素基因相关肽(CGRP)、内皮素-1(ET-1)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的影响。方法:SD大鼠84只,雌雄各半,随机分为对照组、模型组、蛭丹化瘀组方3个剂量(33、16.5、8.25 g/kg)。大鼠气管内滴注LPS复制急性肺损伤大鼠模型,称重法检测大鼠肺含水量,放免法检测各组大鼠血浆ET、CGRP、TNF-α的变化。结果:模型组大鼠肺含水量较正常组明显升高(P0.01),蛭丹化瘀组方(33 g/kg、16.5 g/kg)(P0.01、P0.05)以及阳性药地塞米松(P0.01)可降低内毒素诱导肺损伤大鼠的肺含水量;与正常组比较,模型组大鼠血浆中内皮素(ET)、降钙素基因肽(CGRP)明显增高(P0.01);蛭丹化瘀组方(16.5 g/kg、8.25 g/kg)和阳性药地塞米松可明显降低大鼠血浆ET含量,差异较模型组明显(P0.01);蛭丹化瘀组方33 g/kg可明显增加血浆CGRP含量;与正常组比较,模型组大鼠血浆肿瘤坏死因子(TNF-α)明显增高(P0.01);阳性药地塞米松及蛭丹化瘀组方(33 g/kg、16.5 g/kg、8.25 g/kg)均可明显降低大鼠血浆TNF-α含量(P0.01)。结论:蛭丹化瘀组方方通过升高内毒素诱导肺损伤大鼠CGRP的含量,降低ET-1及TNF-α含量发挥对肺损伤大鼠的保护作用。     

HPLC法测定芪红水煎剂中花旗松素和槲皮素的含量

目的:建立高效液相色谱法测定芪红水煎剂中2种主要有效成分花旗松素和槲皮素的含量。方法:采用Waters Sunfire C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.5%磷酸溶液为流动相梯度洗脱,流速1 m L/min,检测波长290 nm(花旗松素)、365 nm(槲皮素)。结果:花旗松素和槲皮素线性范围分别为0.075 5~0.120 8μg(r=0.999 4)和0.030 8~0.092 4μg(r=0.999 9);平均加样回收率(n=6)分别为102.74%(RSD=1.71%)和102.45%(RSD=1.52%)。结论:本法简便、准确,重复性好,可用于芪红水煎剂中花旗松素和槲皮素的含量测定。亦可作为芪红水煎液质量控制方法之一。     

水陆二仙丹治疗糖尿病肾病机制的网络药理学研究

目的基于网络药理学方法分析临床治疗糖尿病肾病（DN）的有效方剂水陆二仙丹治疗糖尿病肾病的药 理机制，为其临床运用和新药研发提供参考。方法结合文献，通过中药系统药理学数据库与分析平 台（Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform，TCMSP）获取芡实、金樱子 的主要化学成分及其靶点，根据ADME 筛选中药活性组分；通过GenCards、OMIM、TTD、DRUGBANK 数据 库获取糖尿病肾病主要靶点，利用STRING 平台进行蛋白质相互作用分析，而后采用Cytoscape 3.8.0 软件构建 “中药-成分-疾病-靶点”网络。构建PPI 网络并挖掘网络中潜在的蛋白质功能模块。采用R 3.6.0 分析“药物- 成分-靶点-疾病”及其参与的生物过程及通路。结果水陆二仙丹治疗糖尿病肾病的核心活性成分为β-谷甾 醇、槲皮素、山柰酚、维生素E 等，核心靶点有AKT1、MAPK1、PTGS2、JUN 等，水陆二仙丹治疗糖尿病肾 病生物学通路主要作用于AGE-RAGE 信号通路、TNF 通路、VEGF 通路等，其功能主要为调节细胞内激素受 体的生命活动等。结论本研究初步揭示了水陆二仙丹治疗糖尿病肾病的多成分、多靶点、多通路的作用机 制，为水陆二仙丹后续研究和临床应用提供了理论基础。     

通心络对2型糖尿病大鼠肾脏血管紧张素Ⅱ表达的影响

目的:观察2型糖尿病（T2DM）大鼠肾损伤过程中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的表达,探讨通心络对糖尿病早期肾小球高滤过的影响及其作用机制。方法:8周龄SD雄性大鼠40只,采用高脂饲料+低剂量链脲佐菌素建立T2DM大鼠模型,随机分为空白组、模型组、缬沙坦组（10 mg·kg-1·d-1）和通心络组（0.4 mg·kg-1·d-1）,分别于4周和8周观察T2DM大鼠血糖（FBG）、尿白蛋白排泄率（UAER）及肾功能（Scr,BUN,Ccr）的变化;8周末次给药后取肾组织,计算肾重指数（KW/BW）,采用western blot及real time-PCR技术检测AngⅡ和AngⅡ1型受体（AT1R）蛋白和基因的表达。结果:T2DM大鼠的FBG、UAER、Scr、BUN、Ccr及KW/BW较空白组有不同程度的升高（P<0.05）,通心络组FBG无明显变化（P>0.05）,其他各指标水平较模型组均显著降低（P<0.05）;WB及RT-PCR结果显示通心络可以降低肾组织中AngⅡ和AT1R基因蛋白的过度表达(P<0.05)。结论:通心络可以改善T2DM大鼠早期的高滤过状态,抑制尿白蛋白的排泄及肾脏肥大,保护肾功能;通心络可能是通过下调肾组织中AngⅡ的表达,抑制异常活化的RAS来延缓糖尿病肾病的发生发展。     

芎附滴丸质量控制及抗偏头痛药效学研究

目的:建立芎附滴丸(XFDP)的质量标准,并对其进行抗偏头痛的药效学研究。方法:采用高效液相色谱法(HPLC)同时测定XFDP中8种主要成分的含量。评价XFDP对偏头痛大鼠5-羟色胺(5-HT)、β-内啡肽(β-EP)、降钙素基因相关肽(CGRP)、内皮素-1(ET-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、核因子κB(NF-κB)、一氧化氮合酶(NOS)含量,及Calca、c-fos mRNA表达的影响。结果:建立的HPLC法线性关系、精密度、重复性、稳定性良好,各成分的平均加样回收率和相应的RSD分别为阿魏酸100.68(2.76%)、洋川芎内酯I 98.71(2.88%)、洋川芎内酯A 101.66(2.17%)、丁基苯酞100.15(2.60%)、Z-藁本内酯99.50(2.88%)、Z-丁烯基苯酞102.47(2.22%)、香附烯酮100.11(2.91%)、α-香附酮100.66(3.03%)。偏头痛造模后大鼠5-HT、β-EP含量显著降低(P<0.01,P<0.01),CGRP、ET-1、MMP-9、核因子κB、NOS含量显著升高(P<0.05,P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.01),Calca、c-fos mRNA的表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。XFDP可升高模型大鼠5-HT、β-EP含量,降低CGRP、ET-1、MMP-9、核因子κB、NOS含量,降低Calca、c-fos mRNA的表达,而发挥治疗偏头痛的作用。结论:本方法简单、快速、准确,可用于XFDP的质量控制;XFDP通过调节多种神经递质和血管活性物质的表达发挥治疗偏头痛的作用。     

养血安胎方对复发性自然流产小鼠胎盘血管生成与自噬的调控作用研究

目的 探讨养血安胎方治疗复发性自然流产（RSA）的分子机制。方法 构建肾虚血瘀型RSA小鼠模型,养血安胎方干预后收集小鼠胎盘,苏木素伊红（HE）染色、马松（Masson）染色观察小鼠胎盘病理变化、免疫组化法测定小鼠胎盘增殖细胞核抗原（PCNA）、纤维蛋白原（Fibrinogen）及CD34蛋白的表达,Western blot法测定小鼠胎盘血管内皮生长因子（VEGF）、血管内皮细胞生长因子受体2(p-VEGFR2)、p62,Beclin 1,LC3Ⅰ和LC3Ⅱ的蛋白表达,透射电镜观察小鼠胎盘的超微结构。结果 与RSA组比较,RSA+养血安胎组小鼠取材时体重显著增加,胚胎吸收率显著降低;HE染色、Masson染色及PCNA、Fibrinogen蛋白表达显示小鼠胎盘发育状况明显改善,透射电镜结果与p62、Beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的蛋白表达显示小鼠胎盘自噬水平明显降低,CD34、VEGFA和p-VEGFR2蛋白表达显示胎盘血管生成明显增加。结论 养血安胎方能够改善RSA小鼠的胎盘发育状况,促进胎盘血管生成,其方式可能与抑制自噬体与溶酶体的融合,从而抑制自噬有关。     

补肾益髓方及其拆方对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑和脊髓中p-Tau和Beta-tubulin表达的影响

目的:观察补肾益髓(Bu Shen Yi Sui,BSYS)方及其拆方补肾(Bu Shen,BS)和化痰活血(Hua Tan Huo Xue,HTHX)方对实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis,EAE)小鼠脑和脊髓中p-Tau和Beta-tubulin的作用。方法:C57BL/6小鼠雌性随机分为正常对照(NC)、模型(MO)、醋酸泼尼松(PA)、梓醇(CA)、BSYS、BS和HTHX组。造模当天与造模后第7天于小鼠背部两侧皮下注射抗原,即50μg髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)35-55、完全弗氏佐剂(CFA)与结核分支杆菌(TB)混合,并在免疫当天和2 d后腹腔注射500 ng的百日咳毒素(PTX)。每天对小鼠进行灌胃,观察其体重及神经功能评分,并于造模第20 d和第40 d分别取脑和脊髓进行病理检测。采用免疫组化法检测p-Tau和beta-tubulin的表达。结果:与MO组比较,BSYS、BS和HTHX组体重与神经功能评分均出现明显上升,HE染色可观察到炎细胞显著减少,核固缩减轻,同时,BSYS、BS和HTHX方均可明显下调p-Tau表达(P0.05,P0.01),上调beta-tubulin蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:BSYS方及其拆方BS和HTHX均对EAE小鼠有神经保护作用,表现在减少体重丢失,降低神经功能评分,减轻炎炎性细胞浸润,减轻轴突损伤及促进其修复,尤以BSYS全方更为显著。